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iXon SRRF-Stream
SRRF-Stream?是一種全新的實時超分辨顯微功能,僅支持在Andor iXon Life 和iXon Ultra EMCCD 相機上實現此功能。
全新 SRRF-Stream 超分辨
應用于物理和生命科學的智能和多模式光譜平臺
- 實時 –?加強工作流程,采集處理同時進行,避免后續再處理過程。在“實時模式”中查看。
- 低激發光強度(mW-W/cm2) – 獲得更長的活細胞觀察時間和更精確的生理機能。
- 使用傳統的熒光染料,如GFP – ?簡單標記,無光控轉換要求。
- 活細胞動力學 ?– ?每1-2秒全視野超分辨成像。使用ROI時> 10 fps。
- 高性價比 – 升級傳統熒光顯微鏡(寬場、全內反射(TIRF)、轉盤式共聚焦)到超分辨顯微鏡。
iXon SRRF-Stream比較
線粒體
有絲分裂
圖像為熒光標記U2OS細胞系,由Andor Dragonfly轉盤共聚焦顯微鏡拍攝,圖像比較了iXon Life 888 EMCCD相機關閉和打開SRRF-Stream模塊的效果。拍攝條件為:63X物鏡、2X光學放大、 488nm照明。有絲分裂紡錘體結構上可以明顯觀察到分辨能力的大幅提升。通過該區域的線陣強度剖面圖對比進一步證明了這一點。
*U2OS細胞系被固定后,用抗α-微管蛋白抗體(綠色,AF488)和鬼筆環肽(紅色,羅丹明)染色來顯現肌動蛋白,細胞核由DAPI染色。樣品由Klebanovych A., Laboratory of Biology of Cytoskeleton, IMG of the AS CR, v.v.i.提供。
SRRF vs SIM
抗NS5A染色的HCV感染的細胞。上圖分別為寬場,結構光照明超分辨成像(SIM)技術和SRRF成像技術(SRRF寬場成像)拍攝的圖像。圖像是用同一個顯微鏡拍攝細胞的同一區域,并使用相同的物鏡和光路。唯一不同的是SIM由一臺6.5um像素的sCMOS記錄,而寬場和SRRF超分辨由一臺16um像素的iXon EMCCD記錄。SRRF出眾的分辨能力顯而易見,可輕松提供傳統的衍射極限2倍以上的分辨率,而SIM理論上受限于設計原理,只能達到低于2倍的傳統衍射極限分辨率提升。實驗樣品由UCL的Grove實驗室提供。
有絲分裂 2
進行有絲分裂時的哺乳動物細胞。藍色代表DNA染色,綠色為微管,紅色為動粒。左圖顯示了寬場Z 序列, 右圖是相同條件下啟用SRRF的Z系列圖像。 樣品由華威大學Phil Auckland提供,在倫敦大學學院(UCL)的Henriques實驗室成像。
BCS-40 膜
細胞標志物標記的BSC-40活細胞的200秒延時圖像,激發光為635nm LED照明系統。前100幀對應于曝光時間為1秒的寬場成像;第二個100幀對應于SRRF-Stream成像,其中每幀由50幅圖像(20ms曝光時間)的SRRF-Stream處理產生。樣品由David Albrecht提供(UCL 的 Ricardo Henriques和Jason Mercer 實驗室)。
網絡蛋白微結構
mCherry標記的HeLa活細胞的網格蛋白微結構圖像比較,由2 FPS的寬場顯微鏡拍攝。每100幅原始“輸入”圖像生成為一幅超分辨圖像,單幅超分辨圖像的速率為2 FPS。通過SRRF-Stream圖像的小區域線陣強度剖面,表明SRRF有能力分辨相隔150nm的結構。樣品由Caron Jacobs 提供(UCL 的Ricardo Henriques 和 Mark Marsh 實驗室 )。
酵母
Life Act表達染色的裂殖酵母,圖中為3D投影蒙太奇法比較。在相同的曝光時間下,標準寬場與SRRF-Stream 寬場成像的比較。 樣品由Mohan Balasubramanian實驗室(U. Warwick)和Gautam Dey(UCL的Buzz Baum實驗室)提供。
血液
血小板、紅膜、綠色內部顆粒的標準寬場和SRRF寬場成像比較。樣品由UCL的Cutler實驗室提供。
微管蛋白
仍然是表達微管蛋白GFP的Hela活細胞寬場成像,同一區域SRRF-Stream實際延時幀頻1fps(SRRF-Stream使用20ms曝光時間/幀頻50)。樣品由David Albrecht提供(UCL 的Ricardo Henriques和Jason Mercer實驗室)。
iXon SRRF-Stream應用
SRRF-Stream超分辨模塊突破了傳統的衍射極限。此外,使用非復雜樣品標記、結合傳統成像設備和低強度照明即可實時實現超分辨成像,為觀察活細胞結構和實時運動創造條件,并以更低的光損傷實現時空分辨率。
SRRF-Stream的觀測能力
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SRRF-Stream應用
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iXon SRRF-Stream工作流程優勢
SRRF技術由倫敦大學學院里卡多·亨里克博士(Ricardo Henriques)的實驗室開發,Andor通過引入SRRF技術并與Henriques博士密切合作,加強了在iXon EMCCD相機上的優化運行。 Andor也是高級GPU處理優化技術的專家,基于此的SRRF算法,比現有的基于ImageJ的SRRF(NanoJ-SRRF)后處理執行快30倍。通過允許數據采集和SRRF處理并行操作,顯著的加速使工作流程得到優化。
處理速度的比較 - SRRF Stream vs NanoJ-SRRF
- 輸入圖像像素 - 1024 x 1024
- 每個SRRF圖像輸入拍攝圖像數 - 100
- 輸出SRRF像素 - 4096 x 4096
- NVidia GTX 1080 GPU卡
該圖比較100幅原始輸入圖像塊(1024 x 1024像素)的處理速率,以產生4096 x 4096像素的合成SRRF超分辨率圖像。將SRRF-Stream與NanoJ-SRRF進行比較,處理發生在相同的Nvidia GTX 1070 GPU卡上。與NanoJ-SRRF相比, SRRF-Stream加速允許數據采集和處理同時進行,能夠進一步改善工作流程。
由于如今數據處理速度比相機拍攝速度快得多,內置SRRF-Stream功能的相機可以實現實時超分辨,能得到大視野超分辨圖像。
在我們自己的實驗室中全面的測試了SRRF-Stream,我們對他的工作流程以及使用更大視野得到活細胞超分辨率的能力印象深刻。通過將SRRF算法與高性能的iXon結合,我們完成了用于熒光顯微鏡的超分辨率相機。
里卡多·亨瑞克博士
定量成像和納米生物物理學博士
iXon SRRF-Stream使用
為使用SRRF-Stream需要哪些配置?
- SRRF-Stream兼容的iXon Life或iXon Ultra EMCCD
- SRRF-Stream許可證和安裝程序
- 與CUDA兼容的NVidia GPU卡*
- MicroManager軟件(64位)或Andor SDK2(64位)
- 可選:PC工作站 - 預裝了經過推薦和測試的GPU卡,以及支持SRRF-Stream的MicroManager(鏈接到iXon相機的序列號)和帶有SRRF-Stream的Andor SDK2
* Nvidia GPU卡應具有V3.0或更高版本的能力以及4GB或更高版本的GPU內存。請注意,Andor使用“中檔”GTX 1070 進行了大量測試,發現SRRF-Stream處理數據的速度遠遠高于iXon相機采集圖像的速度。
我可以將iXon相機升級到SRRF-Stream嗎?
如果您目前擁有iXon 888,iXon 897,iXon Life 888或iXon Life 897型號,Andor可以升級您的相機以獲得SRRF-Stream超分辨率顯微鏡功能。
- 在升級申請表中提供您的序列號
- 銷售工程師將對PC和GPU的要求提供建議
- 下訂單
- 接收iXon序列號的SRRF-Stream升級包(安裝程序和許可證)
請注意:如果升級iXon 888型號,您還需要請求SRRF-Stream相機優化過程?SRRF-Stream相機優化過程。
MicroManager集成
為了使SRRF-Stream廣泛使用,它已經完全集成到MicroManager(開源成像軟件)開放資源顯微鏡軟件平臺中。
- 在實時模式下輸出實時超分辨率圖像
- 多維度——集成多通道,Z-stack和時間序列采集
- SRRF-Stream參數可以通過“設備屬性瀏覽器”與其他像機參數一起進行調整
其他資源
學習中心提供廣泛的教學視頻,技術文章和網絡研討會,以指導您完成所有成像需求的產品系列。下面的鏈接是我們全新上傳的資料,您可以從這些資料開始了解。
- 技術文章:?“SRRF: Universal live-cell super-resolution microscopy” (DOI 10.1016/j.biocel.2018.05.014)
- 技術文章:SRRF-Stream - Real-Time Super-Resolution in a Camera
- 技術文章: SRRF-Stream Upgrade - Boost your Current iXon EMCCD with Super-Resolution Capability
- 網絡研討會?:NanoJ-SRRF和SRRF-Stream: 適用于大多數現代顯微鏡及常規熒光標記的快速活細胞超分辨技術
- 產品紀要:優化SRRF-Stream性能

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